【摘要】建立了高效液相色谱(HPLC)检测头发提取液中辅酶Q10含量的检测方法。HPLC检测辅酶Q10采用Eclipse Plus C18(4.6*250nm,5µm)为色谱柱,甲醇∶乙醇(v∶v)=20∶80为流动相,流速为1ml/min,检测波长为275nm,柱温为30℃,进样体积为20µl,对本校18~23岁大学生头发中辅酶Q10的含量进行检测分析,结果显示本校18~23岁大学生的头发中辅酶Q10的平均含量为0.97µg/g。
【关键词】高效液相色谱法;头发;辅酶Q10;含量分析
辅酶Q10(Coenzyme Q10),是一种醌环类化合物。它是一种脂溶性抗氧化剂,是生物体内重要的呼吸链电子递氢体,能可逆地进行氧化还原反应,是细胞代谢激活剂[1-2]。辅酶Q10是人类生命不可缺少的重要元素之一,能激活人体细胞和细胞能量的营养,具有提高人体免疫力、 增强抗氧化、 延缓衰老和增强人体活力等功能[3]。头发作为身体的一部分,含有细胞[4],会进行新陈代谢,头发的生长需要营养,头发的好坏就与头发中细胞的新陈代谢的强弱相关。头发作为衡量人体元素的水平应用已相当普遍,证实了发中元素的含量与营养摄入和环境接触是相关的,并用头发作为观察微量元素在体内代谢和个体与环境接触的活检材料[5]。而辅酶Q10也是一种衡量人体健康水平的元素之一。为此,本实验建立了高效液相色谱法(HPLC)来对头发中辅酶Q10的含量进行检测。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
无水乙醇(分析纯,天津大茂厂家);无水乙醇,甲醇(色谱纯,天津科密欧厂家);辅酶Q10原料药(广东润和生物科技有限公司),头发(采集于广东医科大学理发店学生群的头发);高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司),旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 HPLC检测辅酶Q10的色谱条件
色谱柱Eclipse Plus C18(4.6*250nm,5µm),流动相:甲醇∶乙醇(v∶v)=20∶80,流速:1ml/min,检测波长:275nm,柱温:30℃,进样体积:20µl。
1.2.2 头发提取液及对照品溶液的制备
①供试品的制备
A. 头发的来源:采集于广东医科大学理发店18-23岁在校学生的头发。
B. 供试品溶液:精密称取4.5g头发,置于100ml的圆底烧瓶中,加入50ml的提取溶剂,80℃水浴加热60min,实验完后,将样品溶液在80℃旋转蒸,挥干提取溶剂,再用2ml的无水乙醇溶解,经0.22µm滤膜过滤,待测。
②对照品溶液:精密称取辅酶Q10对照品25mg,置于25ml的容量瓶中,加入无水乙醇定容至25ml,超声波震荡溶解5min,冷却后即得对照品储备液,经0.22µm滤膜过滤,待测[6]。
1.2.3 辅酶Q10标准品的标准曲线
精密称取辅酶Q10对照品25mg,置于25ml的容量瓶中,加入无水乙醇定容至25ml,超声波震荡溶解5min,冷却后即得对照品储备液,稀释成一系列浓度的标品,以辅酶Q10浓度X对峰面积Y进行线性回归[5-7]。
作者:李学超