【摘要】目的：探讨表皮生长因子受体信号通路对紧密连接蛋白claudins表达的调控及对皮肤屏障功能的影响。方法：将BABL/c小鼠用浓度为20，50，100mg/kg吉非替尼灌胃及0.1，0.2，0.5mg/kg EGF皮下注射处理为实验组，不加吉非替尼和EGF组分别为对照组，给药第1，7，14天分别测量小鼠表皮水分含量及经表皮水分丢失量评估皮肤屏障功能，Western免疫印迹法检测EGF，claudin1，claudin2，ERK1/2，pERK1/2蛋白表达量，免疫组织化学观察claudin1/2在表皮中的分布情况。结果：动物实验显示吉非替尼组/EGF组小鼠表皮水分含量降地/升高，经表皮水分丢失量增加/减少（P<0.01）。免疫组化显示吉非替尼组小鼠表皮较对照组薄，EGF较对照组厚(P<0.01)。组织病理测量到吉非替尼组较正常对照组表皮薄，EGF组表皮较正常对照组厚（P<0.01）。与对照组相比，吉非替尼组claudin1 ，ERK1/2蛋白表达下降，ERK1/2磷酸化下降、claudin2蛋白表达增加(P<0.05)，EGF组上述观察指标的改变正好与之相反（P<0.05）。结论：EGF可以通过影响ERK1/2的磷酸化而影响claudin1/2的表达，从而影响皮肤屏障功能。
【关键词】表皮生长因子受体，claudin1，claudin2，ERK1/2，皮肤屏障功能
表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂 (epidermal growth factor receptor tyrosine kinases inhibitors，EGFR-TKIs)如吉非替尼，厄洛替尼等应用于多种肿瘤的靶向治疗，同时也出现了引人注意的皮肤毒性反应[1, 2]，通常表现为皮脂溢出部位的丘疹脓疱性损害（60%-80%）和皮肤干燥脱屑（4%-35%）及指甲和毛发的损害[3, 4]，提示EGFR-TKIs可导致皮肤屏障功能的受损。Claudins作为参与皮肤屏障功能的主要紧密连接蛋白，已有研究发现claudin-1基因敲除新生小鼠因表皮过度失水而死亡[5]，新生儿硬化性胆管炎伴鱼鳞病与claudin1基因缺陷有关，且本课题组既往的研究发现皮肤经长期紫外线辐射后其经皮水分丢失量（transepidermal water loss，TEWL）显著增加，这种损伤与claudin1蛋白的下调密切相关，进一步证实claudin蛋白在维持皮肤屏障功能中所起的作用。EGFR-TKIs引发皮肤毒性反应与表皮生长因子的分布及生理作用相关，但发病机制目前并不清楚，推测可能与EGFR下游信号通路的阻断有关。我们前期的研究通过体外细胞培养发现外源性表皮生长因子EGF，EGF受体（EGFR）抑制剂（Gefitinib）激活和抑制EGFR下游信号通路蛋白ERK1/2的磷酸化及紧密连接蛋白claudin1,2的磷酸化过程，而达到促进/抑制HEK细胞屏障功能的目的。整个过程中涉及ERK信号通路的活化和claudin1,2蛋白的表达，分布和活化。外源性EGF作用HEK细胞后，EGF-ERK信号通路激活，claudin1，蛋白表达增加并被活化，claudin2蛋白表达减少，磷酸化水平降低。EGFR受体酪氨酸激酶抑制剂（Gefitinib）作用于HEK细胞后，EGFR-ERK信号通路被抑制，claudin1蛋白表达减少，磷酸化水平降低，claudin2蛋白表达增加，磷酸化水平升高，本研究为了通过动物体内实验进一步证实激活/抑制EGFR对紧密连接蛋白claudin及对皮肤屏障功能的影响。
作者：周沙